pcr的反应包括三个主要步骤:分别是1. denaturation 2. annealing of primers,3. extension of primers。 所谓 denaturing乃是将dna加热变性, 将双股的dna加热后转为单股dna以做为的模板. 而annealing 则是令 primers于一定的温度下附着于模板dna两端。 后在dna聚合酶 e.g. taq-polymerase 的作用下进行引物的延长 extension of primers及另一股的合成。
从分子生物学的发展过程,可以看到在近半个世纪中它是生命科学范围发展为迅速的一个领域,推动着整个生命科学的发展。至今分子生物学仍在迅速发展中,荧光定量pcr仪价格,新成果、新技术不断涌现,但分子生物学的历史还短,积累的资料还不够。例如:在地球上千姿万态的生物携带庞大的生命信息,pcr仪报价,迄今人类所了解的只是的一部分,还未认识---、蛋白质组成生命的许多基本规律;又如即使到2005年我们已经获得人类基因组dna3×109bp的全序列,小型pcr仪,确定了人的5-10万个基因的一级结构,但是要搞清楚这些基因产物的功能、调控、基因间的相互关系和协调,pcr仪,要理解80%以上不为蛋白质编码的序列的作用等等,都还要经历漫长的研究道路。可以说分子生物学的发展前景光辉灿烂,道路还会艰难曲折。
pcr技术的本质是体外---扩增,加热使双链dna解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板dna杂交,在taq dna聚合酶,dntps,mg2+和合适ph缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性***退火***引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的---拷贝数。
普通的pcr仪
一次pcr扩增只能运行一个特定退火温度的pcr仪,又叫传统的pcr仪。
用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的基因进行扩增。
(1)梯度pcr仪: 一次pcr扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通pcr仪。
用途:研究未知dna退火温度的扩增。
(2)原位pcr:将具有细胞定位能力的原位杂交技术运用于从细胞内靶dna的定位分析,在细胞内实现基因扩增的普通pcr仪。
用途:用于在细胞的靶dna所在位置上进行基因扩增。
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