实验室常用的是电动离心机电动离心机转动速度快,要注意安全,---要防止在离心机运转期间,因不平衡或试管垫老化,而使离心机边工作边移动,以致从实验台上掉下来,或因盖子未盖,离心管因振动而后,玻璃碎片旋转飞出,离心管,造成事故。
由于样品组分的密度和沉降系数不同,离心分离后的样品沉淀物会形成层状结构。只需要通过上清液倾出就可以实现离心过程。
离心设备实验室离心机8000转每分钟。离心机在高速旋转的过程中,由离心力所导致的运动使悬浮于液体中的固体物质形成沉淀,也就是悬浮---中或体积较大的物体向转头半径大的方向移动,而或体积较小的部分沉积在转头半径较近的地方。
根据离心原理,可设计多种离心方法,常见下列三大类型:
1.差速离心法。通过逐步增加相对离心力,使一个非均相混合液内形状不同的大小颗粒分步沉淀。
2.密度梯度离心法。离心前,离心管内先装入分离介质(如蔗糖、甘油等),使形成连续的或不连续的密度梯度介质,然后加入样品进行离心
速度区带离心法。离心前,离心管内先装入蔗糖、甘油、cscl、percoll等密度梯度介质,待分离样品铺在梯度液的顶部,离心管底部或梯度层中间,同梯度液一起离心,利用各颗粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同,使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度的梯度层内,达到彼此分离的目的。本法可分离各种细胞、---、染色体、脂蛋白、dna和rna等生物样品。预制梯度等密度离心法。要求在离心前预先配制管底浓而管顶稀的密度梯度介质,常用介质有蔗糖、cscl、cs2so4等,待分离样品一般铺在梯度液顶上,如需挟在梯度液中间或管底部,则需调节样品液密度。离心后,不同密度的样品颗粒到达与自身密度相等的梯度层,即达到等密度的位置而获得分离。
自成梯度等密度离心法。某些密度介质经过离心后会自成梯度,例percoll,可迅速形成梯度,cscl、cs2so4和三碘------胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合,离心开始后,无菌离心管,梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底浓而管顶稀的密度梯度,与此同时,可以带动原来混合的样品颗粒也发生重新分布,到达与其自身密度相等的梯度层里,即达到等密度的位置而获得分离。
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